Preparación de medios de cultivo

1. Reconocimiento e Instructivo de Preparación

• Lea el rotulado del envase del medio de cultivo seleccionado y registre en su pauta de trabajo íntegramente lo leído

2.- Preparación del Medio de Cultivo

• Realice el cálculo aritmético con respecto al volumen de medio a preparar

• Recolecte los materiales y equipo requerido para el proceso de pesada

• Efectúe el proceso de pesada

• Desarrolle la etapa de disolución del medio de cultivo

• Ejecute la etapa de entubado del medio

• Disponga en canastillo los medios para su esterilización

3.- Esterilización del Medio de Cultivo

• Autoclave el medio de cultivo de acuerdo a protocolo

• Determine el pH del medio

4.- Plaqueado del Medio de Cultivo

• Registre las observaciones indicadas previo al uso del Gabinete de Bioseguridad

• Realice el proceso de plaqueado de los medios de cultivo en el Gabinete de Bioseguridad

5.- Control de Esterilidad del Medio de Cultivo

 

6.- Disposición Final del Medio de Cultivo

Labi 2007

Agar Mac Conkey

Medio de Cultivo Agar Sangre

Agar Sangre:  Medio de cultivo enriquecido que permite el desarrollo de todo tipo de bacterias tanto gram positivas como gram negativas, diferencial  (por el tipo de hemolísis) , no selectivo.
La Placa Agar Sangre esta preparada con medio de cultivo en polvo de nombre Agar Base Sangre, tiene como ingredientes agar-agar.  infusión  músculo de corazón, peptona, cloruro de sodio;
El color del medio es ámbar claro una vez se halla agregado sangre  un 5% o 10 %  del volumen total , su color cambia a rojo cereza.
La sangre utilizada para preparar el medio es sangre de cordero, sangre humana ;según los resultados esperados se utiliza tambien sangre de caballo y de conejo, importante considerar que algunas bacterias varían el tipo de hemolisis de acuerdo a procedencia de la sangre.            

El uso de este medio de cultivo se fundamenta en que la  infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos      nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio base aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite detectar hemólisis.                                                                                                                           El medio se prepara  suspendiendo 40 grs de polvo en 1000 cc de agua destilada a punto de ebullición , disolver  hasta obtener una solución homogénea, aplicar calor lentamente  en constante agitación , no permitir   la ebullición , de esta forma aseguramos que los nutrientes no se desnaturalicen. La reconstitución del medio se alcanza cuando el medio se visualiza transparente a trasluz. Llevar a autoclave a esterilizar  a  121ºC  a 1 atmósfera de presión  por  15  minutos ( Mantener variable de temperatura constante).

Enfriar  hasta  50º  temperatura que  se registra en la práctica cuando el dorso de la mano resiste el contacto con el matraz.  Es importante que el medio no registre mayor temperatura para lograr conseguir agar sangre ( temperaturas elevadas generan agar chocolate).  Agregar la sangre  y  homogeneizar.
Medir ph del medio en vaso de precipitado y asi evitar contaminación; el ph del medio a 25ºC debe registrar 7.3  +/- 0.2
Su disposición  en placa de petri estéril, alrededor de 4 mm de espesor unos 18 a 20 ml. Tener presente que debe plaquearse de inmediato después de agregar la sangre ya que la temperatura baja y el agar se solidifica  bajo los 40ª C.
La totalidad del plaqueado en lo posible va a control de esterilización a  37º C   por 24 hr .
  Una muestra,  en placa de agar sangre,  se siembra directamente sobre la superficie sólida del medio de cultivo. Siembra en superficie por inoculo diluido en estrias zig-zag, o por hisopado para depositar inoculo y posterior  dilución en siembra en abanico. Se incuba por 24 hrs. a 37ºC.
El objetivo de la siembra es  el cultivo de muestras diversas para obtener crecimiento bacteriano en colonias aisladas ( cultivo y aislamiento), además del estudio de reacciones hemolíticas en una amplia variedad de microorganismos.


                  T.P.   Juan  Antonio Galindo
                Técnico de Laboratorio Clínico